动物细胞培养的一般步骤是什么（动物细胞培养的步骤简介）

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解答：

1、 复苏，把冻存管从液氮中取出来，立即投入37水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。把上述细胞悬液吸到装10毫升培养基的15毫升的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。把上清液倒掉，加1毫升培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10毫升培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到二氧化碳培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。3天换一次培养基。

2、 传代，培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。把原有培养基吸掉。加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。把细胞吸到15毫升的离心管中，1000转离心5分钟。倒掉上清液，加1-2毫升培养基，把细胞都吹起来。根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

3、 冻存，把细胞消化下来并离心（同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期430分钟，-2030分钟，-80过夜，然后放到液氮灌中保存。冻存液的配制：70%的完全培养基20?%DMSO。二甲基亚砜要慢慢滴加，边滴边摇。

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